要選一款合適的支原體檢測(cè)試劑盒，有如下幾個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo)：

1. 靈敏度。

靈敏度常用支原體基因組的拷貝數(shù)或支原體菌株的CFU表示。

2. 特異性和廣譜性。

質(zhì)量好的試劑盒應(yīng)檢測(cè)的支原體物種越多越多，并且特異性強(qiáng)，即只針對(duì)支原體，不針對(duì)其他細(xì)菌等微生物，沒有交叉反應(yīng)。

3. 穩(wěn)定性。

凍干粉比液體試劑的穩(wěn)定性高。

4. 樣本類型及樣本處理。

一款好的試劑盒，會(huì)標(biāo)出它適合的樣本類型，也會(huì)說明如何處理樣本。要注意有的樣本含有抑制PCR反應(yīng)的物質(zhì)，因此需要處理。

5. 對(duì)照品。

一個(gè)好的試劑盒，會(huì)帶有陽性對(duì)照和內(nèi)控對(duì)照。內(nèi)控對(duì)照是用于監(jiān)測(cè)PCR是否正常。如果樣本含有抑制PCR的物質(zhì)，則內(nèi)控對(duì)照的條帶會(huì)發(fā)生缺失。有嚴(yán)重支原體污染的樣本由于樣本中的支原體對(duì)內(nèi)控對(duì)照產(chǎn)生了競(jìng)爭(zhēng)性抑制，因此支原體條帶越強(qiáng)，內(nèi)控條帶越弱（下圖）。

圖. 1. 100 bp DNA Ladder；2. 陰性對(duì)照，有內(nèi)控條帶；3. 陽性對(duì)照，有支原體陽性條帶；4. 樣本有PCR抑制劑；5.陰性樣本；6.陽性樣本，支原體污染較輕；7.陽性樣本，支原體污染較重。圖片來自Minerva Biolabs公司生產(chǎn)的Venor®GeM Advance支原體檢測(cè)試劑盒說明書

但支原體核酸檢測(cè)法（NAT）并沒有載入我國(guó)藥典。我們藥典的是支原體培養(yǎng)法和DNA染色法。但2018年《中國(guó)藥事》第8期上，中國(guó)食品藥品檢定研究院刊發(fā)了一篇文章——《支原體檢查的核酸檢測(cè)方法及方法學(xué)驗(yàn)證的思考》，提出提出要與接軌，逐漸推進(jìn)NAT的開展，因其“具有快速、靈敏、便捷等特點(diǎn)”。

歐洲藥典規(guī)定，核酸法如替代培養(yǎng)基，核酸法的靈敏度需達(dá)到10 CFU·mL-1；如替代DNA染色法，核酸法的靈敏度需達(dá)到100 CFU·mL-1。該文也提出，需對(duì)NAT進(jìn)行特異性、低檢出限和耐用性的驗(yàn)證。

因此，對(duì)于需要NAT法檢查支原體的生物制品和細(xì)胞治療產(chǎn)品企業(yè)，可選擇試劑盒已經(jīng)驗(yàn)證并提供有參比物質(zhì)的廠家，盡管后續(xù)仍需按照待測(cè)樣本類型進(jìn)行方法的適用性驗(yàn)證，并同步開展藥典方法的平行檢測(cè)研究，但已為NAT法檢查支原體帶來極大的方便。

Minerva Biolabs公司是著名的微生物污染控制公司，創(chuàng)始人來自于德國(guó)的羅伯特·科赫微生物研究所。其支原體檢測(cè)和祛除產(chǎn)品，在世界上居于較高位置。其中提供的用于藥品或生物制品企業(yè)過程控制的試劑盒和標(biāo)準(zhǔn)品如下：

（qPCR法）支原體檢測(cè)試劑盒

英文品名： Venor®GeM qEP

貨號(hào)與規(guī)格： 11-9025，25 tests/盒

  11-9100，100 tests/盒

  11-9250，250 tests/盒

（PCR法）支原體檢測(cè)試劑盒

注：不含聚合酶

英文： Venor® GeM Classic

貨號(hào)與規(guī)格： 11-1025，25 tests/盒

  11-1050，50 tests/盒

  11-1100，100 tests/盒

  11-1250，250 tests/盒

10CFU支原體靈敏度標(biāo)準(zhǔn)品

品名：10CFU™ Sensitivity Standards

100CFU支原體靈敏度標(biāo)準(zhǔn)品

品名：100CFU™ Sensitivity Standards

注意：

1.使用時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格遵循說明書操作流程。任何偏離可能會(huì)造成結(jié)果誤差。

2.加入100CFU標(biāo)準(zhǔn)品的樣品不能超濾濃縮，否則會(huì)導(dǎo)致結(jié)果不可靠。

3.100CFU/ml不能稀釋為10CFU/ml，因支原體存在集聚現(xiàn)象，在溶液中非均一狀態(tài)。

上海締一生物生物科技有限公司作為Minerva公司中國(guó)區(qū)總代理，十幾年來，不斷為中國(guó)生物研究實(shí)驗(yàn)室，以及眾多生物制品企業(yè)，提供了完整高效的支原體等微生物檢測(cè)及祛除解決方案。如有任何需求，可與我們聯(lián)系。